适用(yòng)範圍

維生(shēng)素B12(钴胺素)檢测試劑盒适用(yòng)于(yú)奶粉中(zhōng)添加維生(shēng)素B12（VB12）含量(liàng)的(de)定(dìng)量(liàng)分(fēn)析。該試劑盒可(kě)進(jìn)行96次(cì)测定(dìng)。

实验(yàn)原理(lǐ)

維生(shēng)素B12(钴胺素)檢测試劑盒采用(yòng)微生(shēng)物(wù)方法(fǎ)定(dìng)量(liàng)檢测奶粉中(zhōng)添加VB12的(de)含量(liàng)。微生(shēng)物(wù)檢测体系與(yǔ)國(guó)際規範保持(chí)一(yī)致(zhì)。德氏乳杆菌的(de)生(shēng)长(cháng)離不(bù)開(kāi)VB12，其(qí)生(shēng)长(cháng)强度(dù)與(yǔ)樣(yàng)品中(zhōng)VB12的(de)含量(liàng)有(yǒu)關(guān)，将已加入(rù)德氏乳杆菌的(de)VB12檢测培養基、樣(yàng)品或(huò)标品加入(rù)到(dào)微孔中(zhōng)，37°C避光(guāng)孵育，德氏乳杆菌開(kāi)始(shǐ)生(shēng)长(cháng)直(zhí)至(zhì)VB12被(bèi)完全(quán)消耗，44-48小时(shí)完成(chéng)孵育。采用(yòng)酶标儀读(dú)取(qǔ)610-630nm或(huò)540-550nm下(xià)樣(yàng)品的(de)渾浊(zhuó)度(dù)，将樣(yàng)品浊(zhuó)度(dù)與(yǔ)标準曲(qū)線(xiàn)对(duì)比即可(kě)得到(dào)樣(yàng)品中(zhōng)VB12的(de)含量(liàng)。

更(gèng)多(duō)産品如(rú)下(xià)：

1、将所(suǒ)需試劑從冷(lěng)藏环(huán)境中(zhōng)取(qǔ)出(chū)，置于(yú)室(shì)温（20～25℃）平 衡 30min 以(yǐ)上(shàng)，注意(yì)每種(zhǒng)液体試劑使用(yòng)前(qián)均須搖勻。 

2、取(qǔ)出(chū)需要(yào)數量(liàng)的(de)微孔闆，将不(bù)用(yòng)的(de)微孔闆放(fàng)進(jìn)原锡(xī)箔袋(dài)中(zhōng) 並(bìng)且(qiě)與(yǔ)提(tí)供的(de)干(gàn)燥劑一(yī)起(qǐ)重(zhòng)新(xīn)密封(fēng)，保存于(yú) 2～8℃。切(qiè)勿 冷(lěng)凍。 

3、洗滌液在(zài)使用(yòng)前(qián)也(yě)需回(huí)温。 

4、編号(hào)：将樣(yàng)本和(hé)标準品对(duì)應(yìng)微孔按序編号(hào)，每个(gè)樣(yàng)本和(hé)标 準品做 2 孔平行，並(bìng)記(jì)录(lù)标準孔和(hé)樣(yàng)本孔所(suǒ)在(zài)的(de)位(wèi)置。 

5、加标準品/樣(yàng)本：加标準品/樣(yàng)本 50μL 到(dào)对(duì)應(yìng)的(de)微孔中(zhōng)，然 後(hòu)加入(rù) VB12抗試劑 50μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng)蓋闆膜蓋 闆後(hòu)置 25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng) 30min。 

6、洗闆：小心(xīn)揭開(kāi)蓋闆膜，将孔內(nèi)液体甩干(gàn)，用(yòng)洗滌液 250μL/ 孔，充分(fēn)洗滌 4~5 次(cì)，每次(cì)間(jiān)隔 10s，用(yòng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍干(gàn)（拍 干(gàn)後(hòu)未被(bèi)清(qīng)除的(de)气泡可(kě)用(yòng)未使用(yòng)过(guò)的(de)槍头(tóu)戳破）。 

7、加酶标物(wù)：加入(rù) VB12酶标物(wù) 100μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻， 用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置 25℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng) 15min，取(qǔ)出(chū)重(zhòng)複 洗闆步驟 6。 

8、顯色(sè)：加入(rù)底物(wù)液 A 液 50μL/孔，再加底物(wù)液 B 液 50μL/ 孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置室(shì)温避光(guāng)环(huán)境反(fǎn)應(yìng) 15min。 

9、测定(dìng)：加入(rù)終(zhōng)止液 50μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，設定(dìng)酶标儀 于(yú) 450nm 處(chù)（建議用(yòng)双(shuāng)波(bō)长(cháng) 450/630nm 檢测，請在(zài) 5min 內(nèi)读(dú)完數據(jù)），测定(dìng)每孔 OD 值。