适用(yòng)範圍 

維生(shēng)素 B5 (泛酸(suān))檢測试劑盒适用(yòng)于(yú)奶粉中(zhōng)添加泛酸(suān)（維生(shēng)素B5）含量(liàng)的(de)定(dìng)量(liàng)分(fēn)析。該试劑盒可(kě)進(jìn)行96次(cì)測定(dìng)。 

實(shí)验原理(lǐ)

泛酸(suān)（維生(shēng)素B5）檢測试劑盒采用(yòng)微生(shēng)物(wù)方(fāng)法定(dìng)量(liàng)檢測奶粉中(zhōng)添加泛酸(suān)的(de)含量(liàng)。微生(shēng)物(wù)檢測體(tǐ)系(xì)與(yǔ)國(guó)際規範保持(chí)一(yī)致(zhì)。植物(wù)乳杆菌的(de)生(shēng)长(cháng)离不(bù)開(kāi)泛酸(suān)，其(qí)生(shēng)长(cháng)強(qiáng)度(dù)與(yǔ)样品中(zhōng)泛酸(suān)的(de)含量(liàng)有關(guān)，将含有植物(wù)乳杆菌的(de)泛酸(suān)檢測培養基、样品或(huò)标(biāo)品加入(rù)到(dào)微孔中(zhōng)，37℃避光(guāng)孵育，植物(wù)乳杆菌開(kāi)始(shǐ)生(shēng)长(cháng)，直至(zhì)泛酸(suān)被(bèi)完全(quán)消耗，24小时(shí)完成(chéng)孵育。采用(yòng)酶标(biāo)儀读取(qǔ)610-630nm或(huò)540-550nm下(xià)样品的(de)渾浊(zhuó)度(dù)，将样品浊(zhuó)度(dù)與(yǔ)标(biāo)準曲(qū)線(xiàn)对(duì)比即可(kě)得到(dào)样品中(zhōng)泛酸(suān)含量(liàng)。

1、标(biāo)準品配制 

1）打(dǎ)開(kāi)無菌水(shuǐ)瓶(píng)蓋：沿着箭头(tóu)方(fāng)向(xiàng)向(xiàng)上(shàng)推開(kāi)藍(lán)色(sè)蓋帽(mào)，逆时(shí)針(zhēn)拉開(kāi)鋁(lǚ)塑蓋，取(qǔ)下(xià)整个(gè)蓋帽(mào)，然後(hòu)打(dǎ)開(kāi)瓶(píng)塞，将瓶(píng)塞內(nèi)側朝上(shàng)放(fàng)置。

2）打(dǎ)開(kāi)泛酸(suān)鈣标(biāo)準品瓶(píng)蓋，取(qǔ)xmL無菌水(shuǐ)加入(rù)标(biāo)準品瓶(píng)中(zhōng)（x值見(jiàn)标(biāo)準品瓶(píng)包(bāo)裝(zhuāng)标(biāo)签(qiān)），蓋上(shàng)瓶(píng)蓋，振蕩使标(biāo)準品充分(fēn)溶解(jiě)，即为(wèi)标(biāo)準品工作(zuò)液。

3）取(qǔ)6个(gè)無菌管(guǎn)（1.5或(huò)2.0mL），将标(biāo)準品工作(zuò)液按照说(shuō)明(míng)書(shū)表(biǎo)格進(jìn)行稀釋。标(biāo)準品必須現(xiàn)配現(xiàn)用(yòng)。 

 *标(biāo)注曲(qū)線(xiàn)中(zhōng)已經(jīng)包(bāo)含样品40倍的(de)提(tí)取(qǔ)稀釋倍數。 

2、檢測培養基的(de)配制 

1）打(dǎ)開(kāi)培養基瓶(píng)蓋，用(yòng)無菌鑷子取(qǔ)出(chū)干(gàn)燥劑並(bìng)丢棄。 

2）将10mL無菌水(shuǐ)（必須取(qǔ)自(zì)试劑盒中(zhōng)）加入(rù)泛酸(suān)檢測培養基瓶(píng)中(zhōng)，蓋緊瓶(píng)蓋，振蕩混勻。 

3）保證瓶(píng)蓋密闭的(de)前(qián)體(tǐ)下(xià)，95℃水(shuǐ)浴加热(rè)5min，然後(hòu)快(kuài)速冷(lěng)卻至(zhì)室(shì)温(wēn)（低(dī)于(yú)30℃）。 

4）使用(yòng)0.22μm無菌滤膜过(guò)滤全(quán)部(bù)培養基，用(yòng)15mL無菌离心(xīn)管(guǎn)收(shōu)集全(quán)部(bù)滤液。 

5）取(qǔ)出(chū)凍干(gàn)菌株(zhū)，沿着箭头(tóu)方(fāng)向(xiàng)向(xiàng)上(shàng)推開(kāi)藍(lán)色(sè)蓋帽(mào)，逆时(shí)針(zhēn)拉開(kāi)鋁(lǚ)塑蓋，取(qǔ)下(xià)整个(gè)蓋帽(mào)，輕(qīng)輕(qīng)打(dǎ)開(kāi)瓶(píng)塞，将瓶(píng)塞內(nèi)側朝上(shàng)放(fàng)置；向(xiàng)菌株(zhū)瓶(píng)內(nèi)加入(rù)1mL無菌水(shuǐ)（必須取(qǔ)自(zì)试劑盒中(zhōng)），用(yòng)移液槍吹打(dǎ)混勻，取(qǔ)其(qí)中(zhōng)的(de)YmL（Y值見(jiàn)菌株(zhū)包(bāo)裝(zhuāng)瓶(píng)标(biāo)签(qiān)）加入(rù)过(guò)滤後(hòu)的(de)培養基中(zhōng)，振蕩混勻，即为(wèi)檢測菌液（檢測菌液須現(xiàn)配現(xiàn)用(yòng)）。 

注：如果(guǒ)培養基在(zài)处理(lǐ)的(de)过(guò)程中(zhōng)出(chū)現(xiàn)較大(dà)體(tǐ)積的(de)損失时(shí)，加入(rù)的(de)凍干(gàn)菌株(zhū)體(tǐ)積需要(yào)做相應(yìng)比例的(de)調整。为(wèi)杜绝實(shí)验室(shì)污染，菌株(zhū)瓶(píng)中(zhōng)剩余的(de)菌再用(yòng)瓶(píng)塞密封(fēng)，及时(shí)清(qīng)理(lǐ)出(chū)實(shí)验室(shì)或(huò)者(zhě)高(gāo)壓滅菌处理(lǐ)；制備的(de)檢測菌液如有剩余，也(yě)需要(yào)及时(shí)清(qīng)理(lǐ)出(chū)實(shí)验室(shì)或(huò)者(zhě)高(gāo)壓滅菌处理(lǐ)。 

3、檢測步驟

注：加入(rù)微孔闆中(zhōng)的(de)样品必須为(wèi)無菌样品（使用(yòng)试劑盒中(zhōng)提(tí)供的(de)無菌水(shuǐ)進(jìn)行稀釋）。 

1）取(qǔ)出(chū)所需數量(liàng)的(de)微孔条(tiáo)置于(yú)微孔架上(shàng)，将剩余微孔闆条(tiáo)放(fàng)回(huí)鋁(lǚ)箔袋(dài)中(zhōng)密封(fēng)，2-8℃儲存。 

2）依次(cì)将140μL标(biāo)準品或(huò)样品、140μL檢測菌液加入(rù)微孔中(zhōng)（用(yòng)标(biāo)準品或(huò)样品溶液潤洗槍头(tóu)），然後(hòu)用(yòng)粘胶(jiāo)薄膜蓋好(hǎo)微孔条(tiáo)（揭開(kāi)粘胶(jiāo)薄膜的(de)保護层(céng)，用(yòng)手(shǒu)或(huò)壓舌(shé)闆将粘胶(jiāo)薄膜壓平，使其(qí)充分(fēn)封(fēng)闭微孔闆条(tiáo)）。注:保證粘胶(jiāo)薄膜和(hé)微孔的(de)封(fēng)闭性(xìng)，特(tè)别注意(yì)微孔的(de)邊(biān)緣部(bù)分(fēn)。 

3）在(zài)37℃培養箱(xiāng)中(zhōng)避光(guāng)孵育24小时(shí)。 

4）輕(qīng)輕(qīng)来(lái)回(huí)颠倒混勻微孔闆，使菌液充分(fēn)混勻，然後(hòu)用(yòng)一(yī)只(zhī)手(shǒu)将微孔条(tiáo)固定(dìng)于(yú)微孔架上(shàng)，另(lìng)一(yī)只(zhī)手(shǒu)自(zì)右(yòu)上(shàng)方(fāng)沿对(duì)角(jiǎo)揭開(kāi)粘胶(jiāo)薄膜，静(jìng)置2min待气(qì)泡全(quán)部(bù)消去(qù)（較難消去(qù)的(de)小气(qì)泡用(yòng)移液槍吸出(chū)）後(hòu)用(yòng)酶标(biāo)儀在(zài)610-630nm或(huò)540-550nm下(xià)測量(liàng)渾浊(zhuó)度(dù)。 

注：孵育完成(chéng)後(hòu)，微孔闆可(kě)在(zài)冰箱(xiāng)中(zhōng)保存的(de)最(zuì)长(cháng)时(shí)間(jiān)为(wèi)48h，然後(hòu)用(yòng)酶标(biāo)儀读數。