概要(yào) 

乳铁(tiě)蛋白(bái)(lactoferrin，LF)是(shì)乳汁中(zhōng)一(yī)種(zhǒng)重(zhòng)要(yào)的(de)非(fēi)血(xuè)紅(hóng)素铁(tiě)結合糖(táng)蛋白(bái)，中(zhōng)性(xìng)粒细(xì)胞颗(kē)粒中(zhōng)具有殺菌活性(xìng)的(de)單體(tǐ)糖(táng)蛋白(bái)。 乳铁(tiě)蛋白(bái)不(bù)僅參與(yǔ)铁(tiě)的(de)轉(zhuǎn)運，而(ér)且(qiě)具有廣譜抗菌、抗氧化(huà)、抗 癌、調节免疫系(xì)統等強(qiáng)大(dà)生(shēng)物(wù)功能(néng)，被(bèi)認为(wèi)是(shì)一(yī)種(zhǒng)新(xīn)型抗菌、 抗癌藥物(wù)和(hé)极(jí)具開(kāi)發(fà)潛力的(de)食品和(hé)飼料添加劑。 

本(běn)试劑盒是(shì)應(yìng)用(yòng) ELISA 技术研發(fà)的(de)新(xīn)一(yī)代(dài)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)檢測产品，操作(zuò)时(shí)間(jiān)需 45min，能(néng)減少(shǎo)操作(zuò)誤差和(hé)工作(zuò)強(qiáng)度(dù)。 

實(shí)验原理(lǐ) 

牛乳铁(tiě)蛋白(bái)ELISA檢測试劑盒采用(yòng)双(shuāng)抗體(tǐ)夾心(xīn) ELISA 方(fāng)法，在(zài)酶标(biāo)微孔上(shàng)預包(bāo)被(bèi)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)抗體(tǐ)，預包(bāo)被(bèi)的(de)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)抗體(tǐ)與(yǔ)酶标(biāo)抗體(tǐ) （酶标(biāo)物(wù)）同(tóng)时(shí)與(yǔ)样本(běn)中(zhōng)的(de)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)結合，形成(chéng)抗體(tǐ)—牛乳铁(tiě)蛋白(bái)—酶标(biāo)抗體(tǐ)複合物(wù)，經(jīng) TMB 底物(wù)顯色(sè)，样本(běn)吸光(guāng)值與(yǔ)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)的(de)含量(liàng)呈正(zhèng)相關(guān)，與(yǔ)标(biāo)準曲(qū)線(xiàn)比較再乘以(yǐ)其(qí)对(duì)應(yìng)的(de)稀釋倍數，即可(kě)得出(chū)样本(běn)中(zhōng)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)的(de)含量(liàng)。 

适用(yòng)範圍 

牛乳铁(tiě)蛋白(bái)ELISA檢測试劑盒可(kě)定(dìng)性(xìng)、定(dìng)量(liàng)檢測奶粉样本(běn)中(zhōng)牛乳铁(tiě)蛋白(bái)的(de)含量(liàng)。

貯藏条(tiáo)件(jiàn)及有效期(qī) 

貯藏条(tiáo)件(jiàn)：保存试劑盒于(yú) 2～8℃。 

有效期(qī)：該产品有效期(qī)为(wèi) 12 个(gè)月(yuè)。

1、将所需试劑從冷(lěng)藏环(huán)境中(zhōng)取(qǔ)出(chū)，置于(yú)室(shì)温(wēn)（20～25℃）平 衡 1 小时(shí)或(huò) 37℃温(wēn)箱(xiāng)平衡 30min 以(yǐ)上(shàng)，注意(yì)每種(zhǒng)液體(tǐ)试劑 使用(yòng)前(qián)均須完全(quán)溶解(jiě)搖勻。

2、取(qǔ)出(chū)需要(yào)數量(liàng)的(de)微孔闆，将不(bù)用(yòng)的(de)微孔闆放(fàng)進(jìn)原锡(xī)箔袋(dài)中(zhōng) 並(bìng)且(qiě)與(yǔ)提(tí)供的(de)干(gàn)燥劑一(yī)起(qǐ)重(zhòng)新(xīn)密封(fēng)，保存于(yú) 2～8℃。切(qiè)勿 冷(lěng)凍。 

3、洗涤工作(zuò)液在(zài)使用(yòng)前(qián)也(yě)需回(huí)温(wēn)。

4、編号(hào)：将样本(běn)和(hé)标(biāo)準品对(duì)應(yìng)微孔按序編号(hào)，每个(gè)样本(běn)和(hé)标(biāo) 準品做 2 孔平行，並(bìng)记录标(biāo)準孔和(hé)样本(běn)孔所在(zài)的(de)位(wèi)置。

5、加标(biāo)準品/样本(běn)：加牛乳铁(tiě)蛋白(bái)酶标(biāo)物(wù) 50μL/孔到(dào)对(duì)應(yìng)的(de)微 孔中(zhōng)，再加入(rù)标(biāo)準品或(huò)样本(běn) 50μL/孔。輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng) 蓋闆膜蓋闆後(hòu)置 37℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn)應(yìng) 15min。 

6、洗闆：小心(xīn)揭開(kāi)蓋闆膜，将孔內(nèi)液體(tǐ)甩干(gàn)，用(yòng)洗涤液 250μL/ 孔，充分(fēn)洗涤 4~5 次(cì)，每次(cì)間(jiān)隔 10s，用(yòng)吸水(shuǐ)紙(zhǐ)拍干(gàn)（拍 干(gàn)後(hòu)未被(bèi)清(qīng)除的(de)气(qì)泡可(kě)用(yòng)未使用(yòng)过(guò)的(de)槍头(tóu)戳破）。

7、顯色(sè)：加入(rù)底物(wù)液 A 液 50μL/孔，再加入(rù)底物(wù)液 B 液 50μL/ 孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，用(yòng)蓋闆膜蓋闆後(hòu)置 37℃避光(guāng)环(huán)境中(zhōng)反(fǎn) 應(yìng) 10min。 

8、測定(dìng)：加入(rù)終(zhōng)止液 50μL/孔，輕(qīng)輕(qīng)振蕩混勻，設定(dìng)酶标(biāo)儀 于(yú) 450nm 处（建議用(yòng)双(shuāng)波(bō)长(cháng) 450/630nm 檢測，請在(zài) 5min 內(nèi)读完數據(jù)），測定(dìng)每孔 OD 值。